【產品名稱】

商品名稱：腦心肌炎病毒(EMCV)核酸試劑盒(熒光-PCR法)

【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒

【檢驗原理】本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光PCR 技術，根據 腦心肌炎病毒(EMCV)基因設計特異性引物和熒光探針，用熒光PCR技術對腦心肌炎病毒(EMCV)的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染病料的病原學診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用

【儲存條件及有效期】

 -20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】 ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。

【使用方法】

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

 核酸提取 推薦采用核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取， 請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數每滿10 份，多配制1 份)，每測試反應體系配制如下表：

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

2.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

2.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇：檢測通道（Reporter Dye）FAM，淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

2.3 推薦循環(huán)參數設置：

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例） 反應結束后自動保存結果，根據分析后圖像調節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根 據實際情況自行調整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數期，陰性質控 品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數增長曲線；

陰性：樣本檢測結果無Ct 值，且無特異性擴增曲線；

可疑：樣本檢測結果40＜Ct 值≤45，建議重復檢測，如果檢測通道仍為40值≤45，且曲線有明顯的增長 曲線，判定為陽性，否則為陰性。

5.3 質控標準 陰性質控品：無特異性擴增曲線或無Ct 值顯示；陽性質控品：擴增曲線有明顯指數增長期，且 Ct 值≤32；以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

3. 檢測方法的局限性

1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

3. 陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

5. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

6. 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

7. 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【腦心肌炎病毒(EMCV)核酸試劑盒(熒光-PCR法)注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完quan混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

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